Mechanism of Yishen Tongluo Formula regulating the TLR4/MyD88/NF-κB signaling pathway to ameliorate pyroptosis in diabetic nephropathy mice

ZHANG Yifei ,  

CAO Zijing ,  

ZHANG Zeyu ,  

BAI Xuehui ,  

TANG Jingyi ,  

XI Junyu ,  

WANG Jiayi ,  

XIE Yiran ,  

WU Yuqi ,  

GUO Xi ,  

LIU Zhongjie ,  

LIU Weijing ,  

摘要

تهدف هذه الدراسة إلى استكشاف آلية عشبة تحسين كلية مرض السكري عن طريق تنظيم مسار إشارة Toll-like receptor 4 (TLR4) / MyD88 / NF-κB ، لتحسين وفاة الخلايا الكلى لفئران مصابة بمرض السكري. تم تقسيم 60 فأر ذكر C57BL / 6 إلى مجموعتين بطريقة عشوائية (10 فئران في كل مجموعة تعتبر مجموعة السيطرة و 50 فأر في مجموعة التدخل.) تم تحقيق نموذج الفأر المصاب بمرض السكري عن طريق حقن الفأر بعقار الستربتوزوتوسين (STZ) بمقدار 50 ملغ/ كجم مُعدل ليتم تصميم النموذج الحيواني. بعد تحقيق النموذج، تم تقسيم مجموعة التدخل بطريقة عشوائية إلى مجموعة النموذج ومجموعة جلوكاجون Geller (40μg/ كجم)، ومجموعة الجرعة العالية (15.6 غ/ كجم) والمتوسطة(7.8 غ/ كجم) والمنخفضة (3.9 غ/ كجم) من عشبة تحسين كلية مرض السكري. تم تصنيع جميع مجموعات الجرعات العالية والمتوسطة والمنخفضة بغرم المخمرة التقليدية، وتم حقن مجموعة جلوكاجون Geller بحقن تحت الجلد. تم تغذية مجموعتي السيطرة والنموذج بماء مقطر. تم مراقبة مستوى السكر في الدم عن طريق عينة عشوائية من الفئران كل 4 أسابيع، وتم تحديد محتوى البروتين في البول لمدة 24 ساعة باستخدام الطريقة الكيميائية، كما تم تحديد محتوى الكرياتينين في المصل الدم، الإحليل والقياس في نهاية المدة العلاجية. تم تحديد كثافة الكلى عند الفئران الصغيرة، وتم حساب معامل الكلى. تمت مشاهدة التغيرات في الأنسجة الكلوية بألوان سو موهس-ايري، إيكوتاينوكس-هيف، ألوان شمع اليود-ستان، وماسون، وتم استخدام مختلف التلوث المعملي واختبار القناة المربعة ومعاهدة علم الأمراض في هيكل الأنسجة . تم استخدام طريقة الاختبار الخلد المقترن لاختبار المستوى البيتا 2 من الكرياتينين (β2-MG)، مرافق مركب تربين الكرات داخل الخلية العصبية، والبروتين السام-1 (KIM-1) في البول؛ تم اختبار كلاً من أداء الإيماء وطريقة RNA في هيكل الأنسجة الكلوية للتعبير عن مقطع محيط الأحماض النووية المرتبطة ببنية هيكل يحتوي على مشترك أحادي الكربون وهو نظام NLRP3، الفصيلة الكربونية لمركب الكلوي النووي 1 (Caspase-1)، GSDMD، نشاط الإبتلاغ داخل الخلية العصبية-1β (IL-1β)، وبروتين الإيماء داخل الخلية العصبية-18 (IL-18) وتعبير RNA؛ واستخدام طريقة الألكتروكيمياء المصحوبة بفحص الانقيان ليختبر الكشف عن الأوجيه TLR4، MyD88، NF-κB في الأنسجة الكلوية. في المقارنة مع المجموعة السيطرة، تظهر الفئران في المجموعة النموذجية وفي الفحوصات العشوائية المختلفة للدم رفع المستوى في السكري ونسبة البروتين الموجود في البول لمدة 24 ساعة، سيروم الكرياتينين، ومحتوى اليوريا في البول وكثافة الكلى، بالإضافة إلى ارتفاع مستوى β2-MG ومستوى الكريات داخل الخلية العصبية، والانتقال الذي يكون المشتقات الكربونية اللصق نقطية مرتفع، وكذلك زاد إيجابية موضعية الأكسجين حديد، كصباغة فضة وصباغة الماسون لتغييرات المرض النشط. في المقارنة مع الفئران في المجموعة النموذجية، فإن الفئران في مجموعة التداخل بالجرعة العالية العلاجية بعد 12 أسبوع تظهر إنخفاض في مستوى السكر في الدم (P<0.05)، وكانت نسبة بروتين البول لمدة 24 ساعة في فئران مجموعة التداخل بالجرعة العالية والمتوسطة والمنخفضة، وفي سيروم الكرياتينين ومحتوى اليوريا في البول، وكثافة الكلى هبطت. وكان مستوى β2-MG والكريات داخل الخلية العصبية وكمية KIM-1 انخفضت، وفي محتوى RNA وكمية البروتين NLRP3 وكاسبيز-1 وGSDMD وIL-1β وIL-18 انخفضت. كما انخفضت نسبة الكشف لدى الـ TLR4 وMyD88 وNF-κB وكمية الانتقال الذي كان مشتقاته الكربونية اللصق نقطية موجبة( P<0.05) وانخفضت الآلية العيادية للأضرار السكرية. وخلصت الدراسة إلى أن العشبة تحسين كلية مرض السكري ربما من خلال تنظيم مسار إشارة Toll-like receptor 4 (TLR4) / MyD88 / NF-κB ، لتثبيط وفاة الخلايا الكلوية وبالتالي تقليل تلف الأنابيب بيني الكلى والتأثير الوقائي على الكلية لفئران مصابة بالسكري.

关键词

糖尿病肾病;Yishen Tongluo Formula;pyroptosis;Toll样受体4/髓样分化因子88/核转录因子－κB信号通路;mice

阅读全文