Цель настоящего исследования заключается в изучении механизма воздействия прим-о-глюкозилцимифугина на обмен холестерина в хондроцитах при артрите на фоне деятельности молекулы длинной не кодирующей РНК (неРНК) NEAT1/микроРНК-128-3p (miR-128-3p). В ходе исследования мы использовали 60 мышей C57BL/6, которых наугад подразделили на четыре группы: контроль, шам, модель и прим-о-глюкозилцимифугин. В модельной и экспериментальных группах использовали модель артрита мышей по методу Hulth. Мыши группы прим-о-глюкозилцимифугин принимали препарат внутрь в дозе 30 мг/(кг∙д), остальным группам давали физиологический раствор, оба в течение 8 недель. Организовали исследование структуры хондроцитов методом гематоксилина-эозина (ГЭ). При помощи ПЦР в реальном времени изучили изменения уровня мРНК неРНК NEAT1 и миР-128-3p в тканях хряща у мышей всех групп. Методом иммуноблоттинга проверили уровень экспрессии белков в тканях хрящей мышей, в том числе белков переносчика АТФ-связывающего кассетного белка А1 (ABCA1), рецептора ядра печени β-типа (LXRβ), матрикс металлопротеазы-3 (MMP-3) и белка ассоциированного с митохондриями В-клеток лимфоцитарного лимфомы-2 (Bax). Методом фермент-связанной иммуносорбентной анализы (ELISA) изучили содержание в суставной жидкости туморной некрозуемого фактора-α (TNF-α) и уровень общего холестерина. В эксперименте в культивированных хондроцитах мыши участвовали следующие группы: контрольная, группа интерлейкина-1β (IL-1β), группа IL-1β+прим-о-глюкозилцимифугин, группа IL-1β+переконструированная неРНК NEAT1 (oe-nеРNК NEAT1), группа IL-1β+oe-nеРNК NEAT1+прим-о-глюкозилцимифугин, группа IL-1β+ингибитор миР-128-3p, группа IL-1β+ингибитор миР-128-3p+прим-о-глюкозилцимифугин. Мышей групп IL-1β спровоцировали модель артрита на 24 ч и в каждой группе затем в течение 48 ч проводили интервенцию, для это группам добавляли прим-о-глюкозилцимифугин (90 мг/л) и ингибитор миР-128-3p (50 нмоль/л) соответственно. Методом флюоресцентной гибридизации проверили экспрессию неРНК NEAT1 в хондроцитах. При помощи двойного флюоресцентного плазмидного экспрессионного вектора определили целевые взаимосвязи между nеРНК NEAT1 и миР-128-3p. С помощью векторов для передачи медленных вирусных частиц провели гиперэкспрессию nеРНК NEAT1 в хондроцитах мышей. Методом ПЦР в реальном времени проверили воздействие увеличенной экспрессии nеРНК NEAT1 на уровень мРНК миР-128-3p в хондроцитах. Методом иммуноблоттинга выявили уровень экспрессии белков ABCA1, LXRβ, MMP-3 и Bax в хондроцитах в случае гиперэкспрессии nеРНК NEAT1 и ингибирования миР-128-3p. Результаты гематоксилина-эозина показали, что прим-о-глюкозилцимифугин значительно улучшает структуру хрящей при артрите. Результаты ПЦР в реальном времени показали, что уровень мРНК nеРНК NEAT1 в тканях хряща в группе прим-о-глюкозилцимифугин был ниже, а мРНК miR-128-3p был выше, по сравнению с группой модель. Результаты иммуноблоттинга показали, что в тканях хрящей у мышей группы прим-о-глюкозилцимифугин был повышен уровень экспрессии белков ABCA1 и LXRβ, а снижен уровень экспрессии белков MMP-3 и Bax по сравнению с группой модель. Результаты ELISA показали, что содержание TNF-α в суставной жидкости у мышей группы прим-о-глюкозилцимифугин было ниже по сравнению с группой модель (P<0.05>). Уровень общего холестерина в суставной жидкости у мышей группы прим-о-глюкозилцимифугин был ниже по сравнению с группой модель (P<0.05>). Результаты флюоресцентной гибридизации показали, что в группе IL-1β+прим-о-глюкозилцимифугин средняя интенсивность флуоресценции неРНК NEAT1 была снижена (P<0.05>). Результаты двойного флюоресцентного плазмидного экспрессионного вектора показали, что в группе миР-нк+группа образцов с nеРНК NEAT1-WT релятивная активность флюресцентного белка была снижена (P<0.05>). Результаты ПЦР в реальном времени показали, что уровень экспрессии мРНК nеРНК NEAT1 в группе IL-1β+oe-nеРNК NEAT1+прим-о-глюкозилцимифугин был ниже, а мРНК miR-128-3p был выше, по сравнению с группой IL-1β+oe-nеРNК NEAT1. Результаты иммуноблоттинга показали, что в группах IL-1β+oe-nеРNК NEAT1+прим-о-глюкозилцимифугин и IL-1β+ингибитор миР-128-3p+прим-о-глюкозилцимифугин уровень экспрессии белков ABCA1 и LXRβ был ниже, а уровень экспрессии белков MMP-3 и Bax был выше по сравнению с группой IL-1β+прим-о-глюкозилцимифугин (P<0.05>). Выводы. Прим-о-глюкозилцимифугин способствует улучшению обмена холестерина в хондроцитах при артрите путем медиации неРНК NEAT1/miR-128-3p.

升麻素苷;osteoarthritis;软骨细胞;cholesterol metabolism;mice