El objetivo de este estudio fue investigar el efecto del método de estimulación del meridiano Du Mai en el comportamiento de ratas con trastorno del espectro autista (TEA) inducido por ácido valproico (VPA), y estudiar los posibles mecanismos de acción del método de estimulación del meridiano Du Mai en ratas con TEA utilizando la técnica de secuenciación transcripcional del lóbulo frontal (RNA-Seq). Métodos: Se tomaron 9 ratas gestantes de 12.5 días de edad, de la cepa SD, y se inyectaron 6 con 600 mg/kg de VPA por vía intraperitoneal para modelar el TEA, mientras que las 3 restantes se inyectaron con el mismo volumen de solución salina fisiológica. Después del parto, se evaluó el comportamiento de las crías macho en el día 21 mediante la prueba de tres cámaras de sociabilidad y la prueba de campo abierto para establecer el modelo animal. Las crías macho de ratas con TEA modelo se dividieron aleatoriamente en el grupo modelo y el grupo de estimulación, con 5 ratas en cada grupo; mientras que se seleccionaron aleatoriamente otras 5 crías macho de ratas inyectadas con solución salina fisiológica para formar el grupo de control. El grupo de control no recibió ninguna intervención, mientras que al grupo de estimulación se le aplicó estimulación del meridiano Du Mai con un dispositivo de estimulación desarrollado por el equipo, dos veces al día durante 14 días, un total de 28 veces. Al final de la intervención, se evaluaron el índice de sociabilidad (SI) y el índice de preferencia social (SPI) de las ratas con TEA utilizando la prueba de tres cámaras, y se evaluó la distancia total recorrida por las ratas y el tiempo de permanencia en la zona central durante la prueba de campo abierto. Además, se evaluó el comportamiento perseverante de las ratas utilizando la prueba de enterramiento de canicas, y se evaluó la actividad de los cuerpos celulares de las neuronas de la corteza prefrontal con tinción de Nissl. Se utilizaron la técnica de secuenciación transcricional del lóbulo frontal (RNA-Seq) para detectar los genes con expresión diferencial (DEGs) en la corteza prefrontal de las ratas, y se realizó un análisis de enriquecimiento de genes (GO) y del libro de texto de genes y genomas de Kyoto (KEGG). Se utilizó la PCR cuantitativa de fluorescencia en tiempo real (RT-qPCR) para medir los DEGs, y western blotting para medir las proteínas relacionadas con las vías de señalización. Resultados: Antes de la intervención, en comparación con el grupo de control, las ratas de estimulación y el grupo modelo mostraron una disminución significativa en SI y SPI, y una disminución en la distancia total recorrida y el tiempo en la zona central (P <0.05). Después de la intervención, en comparación con el grupo de control, las ratas con TEA del grupo modelo mostraron una disminución en la actividad de SI y SPI, una disminución en la distancia total recorrida y el tiempo en la zona central, un aumento en el número de canicas enterradas, y una disminución en el número de neuronas Nissl en el lóbulo prefrontal (P <0.05); en comparación con el grupo modelo, las ratas del grupo de estimulación mostraron un aumento en la actividad de SI y SPI, un aumento en la distancia total recorrida y el tiempo en la zona central, una disminución en el número de canicas enterradas, y un aumento en el número de neuronas Nissl en el lóbulo prefrontal (P <0.05). Los resultados de la secuenciación de ARN mostraron que, en comparación con el grupo modelo, el método de estimulación del meridiano Du Mai puede regular la expresión de 213 DEGs en la corteza prefrontal de las ratas con TEA, incluyendo 181 genes sobreexpresados y 32 genes subexpresados, y el análisis GO se centró principalmente en los componentes celulares. En el análisis de enriquecimiento de KEGG, se enriquecieron un total de 181 vías de señalización, de las cuales 67 presentaron diferencias significativas (P <0.05), y la vía de señalización de la quinasa 3-fosfoinositol (PI3K) / proteína quinasa B (AKT) fue la más enriquecida. Los resultados de la validación experimental mostraron que la PCR cuantitativa de fluorescencia en tiempo real (RT-qPCR) mostró que, en comparación con el grupo de control, las ratas con TEA del grupo modelo tras la intervención mostraron una disminución en la expresión de factor de crecimiento transformante α (TGF-α), receptor del factor de crecimiento epidérmico 3 (ErbB3), serina / treonina proteína quinasa 2 (Sgk2) y cadena α2 de colágeno tipo I (Col1α2), y un aumento en la expresión de factor de crecimiento hepatocitario (Hgf) (P <0.01); en comparación con el grupo modelo, las ratas del grupo de estimulación mostraron un aumento en la expresión de TGF-α, ErbB3, Sgk2 y Col1α2, y una disminución en la expresión de Hgf (P <0.05), lo que fue consistente con los resultados de la secuenciación de ARN; los resultados de western blotting mostraron que, en comparación con el grupo de control, las ratas con TEA del grupo modelo mostraron una disminución en la expresión de proteínas reguladoras de la corteza prefrontal relacionadas con la sinapsis neuronal, incluyendo proteína de regulación del nervio 1 (NRG1), ErbB3, óxido nítrico sintasa neuronal (nNOS), PI3K, AKT, nNOS fosforilada (p-nNOS), PI3K fosforilada (p-PI3K) y AKT fosforilada (p-AKT) (P <0.05); en comparación con el grupo modelo, las ratas del grupo de estimulación mostraron un aumento en la expresión de NRG1, ErbB3, nNOS, PI3K, AKT, p-nNOS, p-PI3K y p-AKT de la corteza prefrontal (P <0.05). Conclusión: El método de estimulación del meridiano Du Mai puede mejorar el comportamiento social, la ansiedad y la actividad neuronal en ratas modelo de TEA, y su mecanismo podría estar relacionado con la activación de la vía de señalización PI3K/AKT.

Masaje; Meridiano Du Mai; Trastorno del espectro autista; Comportamiento; Secuenciación transcripcional