培元抗癌汤通过PI3K-AKT-mTOR信号通路调节Lewis肺癌自噬抑制肿瘤生长和转移的实验研究

培元抗癌汤通过PI3K-AKT-mTOR信号通路调节Lewis肺癌自噬抑制肿瘤生长和转移的实验研究 Effect of Peiyuan Kang’ai Decoction in regulating autophagy of Lewis lung cancer through PI3K-AKT-mTOR pathway to inhibit tumor growth and metastasis 1 first-author 司海龙，男，博士，副主任医师 司海龙，男，博士，副主任医师 1 1 1 1 1 1 corresp corresp #王惠玲，女，博士，副主任医师，主要研究方向：中医药防治内分泌疾病的临床与基础研究，E-mail：105586073@qq.com #王惠玲，女，博士，副主任医师，主要研究方向：中医药防治内分泌疾病的临床与基础研究，E-mail：105586073@qq.com Wang Huiling, Ph.D., Associate chief Physicion, Shaanxi University of Chinese Medicine, Xixian Avenue, Xixian New District, Xianyang, 712046. E-mail: 105586073@qq.com Wang Huiling, Ph.D., Associate chief Physicion, Shaanxi University of Chinese Medicine, Xixian Avenue, Xixian New District, Xianyang, 712046. E-mail: 105586073@qq.com 105586073@qq.com 陕西中医药大学 　 陕西 　 712046 陕西中医药大学 　 陕西 　 712046 Shaanxi University of Chinese Medicine, Shaanxi 712046, China Shaanxi University of Chinese Medicine, Shaanxi 712046, China 目的 2 观察培元抗癌汤对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长及肿瘤肺转移的抑制作用，探讨培元抗癌汤对自噬及PI3K-AKT-mTOR信号通路的影响。 方法 2 Lewis肺癌细胞接种在C57BL/6小鼠右腋皮下，制成Lewis肺癌荷瘤小鼠模型。将荷瘤小鼠随机分为模型组、顺铂组、培元抗癌汤组、培元抗癌汤－顺铂组，分别给予中药灌胃、顺铂腹腔注射，进行药物干预后，观察各组小鼠生存质量；观察肺转移灶、计算肺转移抑制率；称取各组荷瘤小鼠肿瘤的质量、计算抑瘤率；透射电镜观察自噬泡的形成；Western blot法检测肿瘤组织中自噬因子LC3Ⅰ及LC3Ⅱ蛋白的表达，检测肿瘤组织中PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR表达。 结果 2 模型组、顺铂组小鼠生存质量差，小鼠有聚集、毛发脱落、反应迟缓等现象，培元抗癌汤组、培元抗癌汤－顺铂组小鼠生存质量较好。与模型组比较，培元抗癌汤组、培元抗癌汤－顺铂组能明显抑制肺转移( P < 0.05)，顺铂组有抑制肺转移趋势，但差异无统计学意义( P > 0.05)；培元抗癌汤－顺铂组肺转移抑制率则明显高于培元抗癌汤组。与模型组比较，顺铂组、培元抗癌汤组、培元抗癌汤－顺铂组能明显抑制肿瘤生长，差异有统计学意义( P < 0.05)，顺铂组高于培元抗癌汤组( P < 0.05)，培元抗癌汤－顺铂组明显高于培元抗癌汤组和顺铂组。与模型相比，顺铂组、培元抗癌汤组、培元抗癌汤－顺铂组自噬泡明显增多，提示自噬增强。各用药组肿瘤组织中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ均明显高于模型组( P < 0.05)；与培元抗癌汤组比较，顺铂组、培元抗癌汤－顺铂组的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达更高( P < 0.05)，而培元抗癌汤－顺铂组的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达最高。与模型组比较，各用药组肿瘤组织中PI3K、AKT、mTOR的表达无明显差异( P > 0.05)，各用药组肿瘤组织中p-PI3K、p-AKT、p-mTOR表达均明显低于模型组( P < 0.05)；与培元抗癌汤组比较，顺铂组、培元抗癌汤－顺铂组的p-PI3K、p-AKT、p-mTOR表达更低( P < 0.05)，而培元抗癌汤－顺铂组的p-PI3K、p-AKT、p-mTOR表达最低。 结论 2 培元抗癌汤能明显改善小鼠生存质量及抑制肿瘤生长及转移，其机制可能是抑制PI3K-AKT-mTOR信号通路，增强肿瘤自噬。 Objective 2 To observe the inhibitory effect of Peiyuan Kang’ai (Healthy qi-supplementing Anti-cancer) Decoction(PYKA Decoction) on tumor growth and lung metastasis of Lewis lung cancer mice, and to explore the effect of PKKA Decoction on autophagy and PI3K-AKT-mTOR pathway. Methods 2 Lewis lung cancer cells were inoculated subcutaneously in the right armpit of C57BL/6 mice to establish Lewis lung cancer bearing mice model. The tumor bearing mice were randomly divided into model group, cisplatin group, PYKA Decoction group and PYKA Decoction-cisplatin group. After the interventions of traditional Chinese medicine decoction by gavage and intraperitoneal injection of cisplatin, the quality of life of mice was observed; the lung metastasis was observed and the inhibition rate of lung metastasis was calculated; the tumor mass and tumor inhibition rate were calculated; the formation of autophagic vesicles was observed by transmission electron microscope; Western blot was used to observe the expression of autophagy factors LC3Ⅱ/ LC3Ⅰ, as well as the expression levels of PI3K/p-PI3K, AKT/p-AKT and mTOR/p-mTOR in tumor tissues. Results 2 The quality of life of mice in the model group and cisplatin group was poor, and there were aggregation, hair shedding and slow reaction in mice; while the quality of life of mice in PYKA Decoction group and PYKA Decoction-cisplatin group was better. Compared with those of the model group, in PYKA Decoction group and PYKA Decoction-cisplatin group, lung metastasis was significantly inhibited ( P < 0.05), and in the cisplatin group, there was a tendency to inhibit lung metastasis, but there was no statistical significance ( P > 0.05). Compared with that of the model group, the growth rate of tumor was significantly inhibited in the PYKA Decoction group, PYKA Decoction-cisplatin group and cisplatin group ( P < 0.05); specifically, the inhibition rate of tumor was higher in the cisplatin group than the PYKA Decoction group ( P < 0.05), and significantly higher in the PYKA Decoction-cisplatin group, compared with that of PYKA Decoction group or cisplatin group. Compared with the model group, the number of autophagic vesicles increased significantly in cisplatin group, PYKA Decoction group and PYKA Decoction-cisplatin group, suggesting that autophagy was enhanced. Compared with PYKA Decoction group, the expression of LC3Ⅱ/ LC3Ⅰ was higher in the cisplatin group and PYKA Decoction-cisplatin group ( P < 0.05), with that in the PYKA Decoction-cisplatin group being the highest( P < 0.05). Compared with the model group, there was no significant difference in the expression of PI3K/AKT /mTOR in the tumor tissues of the treatment groups ( P > 0.05). The expression levels of p-PI3K/p-AKT/p-mTOR in the tumor tissues of the treatment groups were significantly lower than that of the model group ( P < 0.05); compared with that of the PYKA Decoction group, the expression of p-PI3K/p-AKT/p-mTOR in cisplatin group and PYKA Decoction-cisplatin group was lower ( P < 0.05), with that in PYKA Decoction-cisplatin group being the lowest( P < 0.05). Conclusion 2 PYKA Decoction could potentially improve the quality of life of mice and inhibit tumor growth and metastasis. The mechanism may be related to the inhibition of PI3K-AKT-mTOR signaling pathway and enhancement of tumor autophagy. Lewis肺癌 培元抗癌汤 自噬 PI3K-AKT-mTOR信号通路 小鼠 Lewis lung carcinoma Peiyuan Kang’ai (Healthy qi-supplementing Anti-cancer) Decoction autophagy PI3K-AKT-mTOR pathway mice 从De Duve 1963年首次提出自噬(autophagy)的概念到Yoshinori Ohsumi 2016年因阐明了自噬的机制而获得诺贝尔生理学或医学奖，人类对自噬的研究认识不断深入 [ 1 1 ] 。自噬最初的科学定义是将细胞质中物质运送到溶酶体中进行降解的过程 [ 2 2 ] ，它的存在起到维持细胞内稳态、调节细胞信号传导和促进细胞存活的重要作用，因此自噬是细胞内最基本降解机制 [ 3 3 ] 。细胞自噬可分为3种：即大自噬、微自噬以及伴侣介导自噬 [ 4 4 ] ，目前研究多集中在大自噬。近年来大量的研究证明细胞自噬现象与恶性肿瘤增殖、侵犯和转移有着密切的联系 [ 5 5 - 6 6 5-6 ] 。PI3K-AKT-mTOR信号通路与多种疾病相关，近年来发现该通路的抑制或激活能够调控自噬，进而影响原发疾病的进展 [ 7 7 - 8 8 7-8 ] 。2019年1月国家癌症中心发布了最新的中国癌症统计报告，报告显示肺癌仍在中国恶性肿瘤发病的第一位，2015年中国新发肺癌病例约为78.7万例 [ 9 9 ] ，因此肺癌的防治工作任重而道远。尽管靶向、免疫药物已被广泛地应用于临床，但并不能解决所有问题，未能取得理想的疗效。 中医药作为治疗肺癌的重要手段有独特疗效，为改善患者生存质量、延长生命起到了积极作用，受到广大肺癌患者欢迎。陕西省名中医、中医肿瘤内科名家李仁廷教授依据多年临床经验组方培元抗癌汤，前期的研究证实：该方能抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞裸鼠移植肿瘤生长，调控与凋亡相关蛋白，诱导肿瘤细胞发生凋亡 [ 10 10 ] ；在临床实验方面培元抗癌汤联合FOLFOX4化疗方案治疗中晚期肝癌安全、有效 [ 11 11 ] 。本研究采用C57BL/6小鼠Lewis肺癌移植瘤模型，观察培元抗癌汤通过调节PI3K-AKT-mTOR通路诱导Lewis肺癌细胞自噬，并抑制肿瘤生长和转移的作用。 1　材料 1 1.1　动物与细胞株 2 C57BL/6纯系小鼠40只，SPF级，雄性，体质量(20±2)g，由三峡大学提供，许可证号为SCXK(鄂) 2017-0012。饲养于陕西中医药大学实验中心SPF级动物房，室温25 ℃，湿度70%。Lewis肺癌细胞株，购于中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心。 1.2　伦理审查 2 实验通过陕西中医药大学伦理审查委员会审查编号：SUCMDL20170303001。 1.3　药品及试剂 2 培元抗癌汤的组成药物：西洋参15 g、郁金12 g、黄芪15 g、炒白术15 g、莪术15 g、白花蛇舌草15 g、茯苓15 g、厚朴12 g、法半夏12 g、焦山楂12 g，购于陕西中医药大学附属医院，将草药浓煎至2 g/mL的煎剂，储存于4 ℃冰箱备用。顺铂(DDP)，阿拉丁公司，批号：D109812；硝酸铅，SPI-CHEN公司，批号：10088-74-8；EPOXY resin monomer，SPI-CHEN公司，批号：90529-77-4；Osmium tetroxide，TEDPELLA公司，批号：18456；BCA蛋白浓度测定试剂盒，碧云天生物有限公司，批号：P0010；兔多抗GAPDH 37 KD，杭州贤至生物有限公司，批号：AB-P-R 001；兔多抗PI3K(85 kD)，CST，Cell Signaling Technology公司，批号：4292；兔多抗p-PI3K(85 kD)，CST，Cell Signaling Technology公司，批号：4228；兔多抗AKT(55 kD)，Affinity公司，批号：AF6261；兔多抗p-AKT(SER473)(60 kD)，Affinity公司，批号：AF0016；兔多抗mTOR(289 kD)，Affinity公司，批号：AF6308；兔多抗p-mTOR(289 kD)，CST，Cell Signaling Technology公司，批号：2971；兔多抗LC3(16/14 kD)，Affinity公司，批号：AF5402。 1.4　仪器 2 倒置显微镜，德国Leica公司，090-135.002型；透射电镜，日本HITACHI/美国FEI公司，HT7700-SS/FEI Tecnai G20 TWIN；体视显微镜，日本Olympus公司，SZX7型；电泳仪电源(DYY-7C)、垂直电泳槽(DYCZ-24DN)、电转仪(DYCZ-40)，北京六一仪器厂；酶标仪，Thermo公司；HI650离心机，湖南湘仪实验室仪器开发有限公司。 2　方法 1 2.1　造模方法 2 复苏、消化传代Lewis细胞，取对数生长期细胞，用0.25%胰蛋白酶消化后，制备1×10 10 L －1 单细胞悬液，0.2 mL接种于C57BL/6小鼠右腋部皮下。14 d后Lewis肺癌荷瘤种鼠成瘤，剥离瘤体，洗净后剪碎，加生理盐水研磨，制成1×10 10 L －1 单细胞悬液，取0.2 mL肿瘤细胞悬液接种在40只小鼠右腋皮下，完成Lewis肺癌荷瘤鼠模型造模，腋下可触及瘤体为造模成功。 2.2　动物分组及给药 2 取32只造模成功的C57BL/6荷瘤小鼠随机分为模型组、顺铂组、培元抗癌汤组、培元抗癌汤－顺铂组，每组8只。造模成功后顺铂组和培元抗癌汤－顺铂组于第1、3、5天腹腔注射DDP溶液1 mL/d(含顺铂0.1 mg)，模型组和培元抗癌汤组腹腔注射生理盐水1 mL/d，每日1次；第1天起，培元抗癌汤组、培元抗癌汤－顺铂组给予中药灌胃0.2 mL/d(生药质量浓度2 g/mL，相当于成人临床有效剂量的9倍)，模型组和顺铂组给予生理盐水灌胃0.2 mL/d，每日1次；连续灌胃给药14 d。14 d后，脱颈处死，取瘤、取肺。 2.3　观察小鼠生存质量 2 每天记录模型组、顺铂组、培元抗癌汤组、培元抗癌汤－顺铂组小鼠生存情况。 2.4　观察肺转移灶、计算肺转移抑制率 2 打开胸腔，分离气管，用1 mL注射器针头插入气管内，包氏固定液注入，将整个肺取下，包氏固定液固定24 h。在倒置显微镜下观察肺转移灶，计数转移灶的数目。肺转移抑制率(%)＝(1－实验组平均肺转移灶数量/模型组平均肺转移灶数量)×100%。 2.5　称取各组荷瘤小鼠肿瘤的质量、计算抑瘤率 2 小心剥取瘤体，用电子天平称量肿瘤质量，计算各组荷瘤小鼠的平均瘤重、抑瘤率。抑瘤率(%)＝(1－实验组平均瘤重/模型组平均瘤重)×100% 2.6　透射电镜观察自噬泡的形成 2 肿瘤组织用2.5%的戊二醛固定，0.1 mol/L磷酸缓冲液漂洗，1%锇酸－0.1 mol/L磷酸缓冲液固定，0.1 mol/L磷酸缓冲液漂洗，丙酮渗透，包埋、切片后用铀铅双染色，透射电镜观察。 2.7　Western blot检测自噬因子LC3Ⅰ及LC3Ⅱ的蛋白表达，PI3K、AKT、mTOR蛋白表达 2 将肿瘤组织块裂解，置于自动匀浆机中匀浆，BCA法测定蛋白浓度，沸水浴蛋白变性。制备电泳胶，电泳分离及点转移，敷一抗，洗去多余一抗，敷二抗，洗去多余二抗，将ECL试剂中增强液与稳定的过氧化物酶溶液按1∶1比例混匀，滴加工作液于PVDF膜上，覆上保鲜膜，显影、定影，冲洗胶片，用BandScan分析胶片灰度值。 2.8　统计方法 2 采用SPSS软件进行数据处理。符合正态分布或近似符合正态分布的计量资料以均值±标准差( <math id="M1"><mover accent="true"><mi>x</mi><mo>¯</mo></mover></math> ± s )表示。方差齐的多组间比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA)，组间两两比较采用LSD检验，检验水准为 α ＝0.05， P < 0.05为差异有统计学意义。 3　结果 1 3.1　各组小鼠生存质量 2 模型组、顺铂组小鼠生存质量差，小鼠有聚集、毛发脱落、反应迟缓等现象；培元抗癌汤组、培元抗癌汤－顺铂组小鼠生存质量较好；少聚集，进食可，反应较灵敏。 3.2　肺转移灶及肺转移抑制率 2 与模型组比较，培元抗癌汤组、培元抗癌汤－顺铂组能明显抑制肺转移( P < 0.05)，顺铂组有抑制肺转移趋势，但差异无统计学意义( P > 0.05)，培元抗癌汤－顺铂组肺转移抑制率则明显高于培元抗癌汤组。结果见 表1 表1 。 注：与模型组比较* P < 0.05；与培元抗癌汤组比较△ P < 0.05。 Note: * P < 0.05 compared with model group; △ P < 0.05 compared with PYKA Decoction group. 组别Groups 转移灶Nodules (个) 肺转移抑制率rate(%) 瘤重Tumor weight(g) 抑瘤率Tumor inhibition rate(%) 模型组Model group 2.38±0.92 － 4.32±0.49 － 顺铂组Cisplatin group 1.63±0.74 31.58 2.17±0.40 *△ 49.29 培元抗癌汤组PYKA Decoction group 1.50±0.76 * 36.84 3.15±0.37 * 27.70 培元抗癌汤－顺铂组PYKA Decoction-cisplatin group 0.63±0.95 *△ 73.68 1.73±0.31 *△ 62.60 F   7.373   66.712 P   <0.001   <0.001 3.3　小鼠肿瘤称取、抑制率 2 顺铂组、培元抗癌汤组、培元抗癌汤－顺铂组能明显抑制肿瘤生长，与模型组比较有统计学意义( P < 0.05)，顺铂组高于培元抗癌汤组( P < 0.05)，培元抗癌汤－顺铂组明显高于培元抗癌汤组和顺铂组。结果见 表1 表1 。 3.4　自噬状态比较 2 模型组细胞内结构破坏严重，胞质减少，胞内结构破坏。与模型相比，顺铂组、培元抗癌汤组、培元抗癌汤－顺铂组自噬泡(红色箭头所指示)明显增多，培元抗癌汤－顺铂组最为明显，提示自噬增强。结果见 图1 图1 。 A：模型组；B：顺铂组；C：培元抗癌汤组；D：培元抗癌汤－顺铂组；红色箭头：自噬泡；标尺＝1 μm。 A：Model group；B：Cisplatin group；C：PYKA Decoction group；D：PYKA Decoction-cisplatin group; Red arrow: autophagic vacuole；Scale＝1 μm. 3.5　各组肿瘤组织中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达的影响 2 与模型组比较，培元抗癌汤组，顺铂组、培元抗癌汤－顺铂组LC3Ⅰ表达明显增高，各用药组组织中LC3Ⅰ表达无明显区别。结果见 图2 图2 。 1：模型组；2：顺铂组；3：培元抗癌汤组；4：培元抗癌汤－顺铂组。 1: Model group; 2: Cisplatin group; 3: PYKA Decoction group; 4: PYKA Decoction-cisplatin group. 各用药组肿瘤组织中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ均明显高于模型组( P < 0.05)；与培元抗癌汤组比较，顺铂组、培元抗癌汤－顺铂组的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达更高( P < 0.05)，而培元抗癌汤－顺铂组的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达最高。结果见 表2 表2 。 注：与模型组比较* P < 0.05；与培元抗癌汤组比较△ P < 0.05。 Note: * P < 0.05 compared with model group; △ P < 0.05 compared with PYKA Decoction group. 组别Groups LC3Ⅱ/ LC3Ⅰ 模型组Model group 0.14±0.02 顺铂组Cisplatin group 0.35±0.03 *△ 培元抗癌汤组PYKA Decoction group 0.26±0.01 * 培元抗癌汤－顺铂组PYKA Decoction-cisplatin group 0.45±0.02 *△ F 259.940 P <0.001 3.6　各组肿瘤组织中PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR的表达 2 与模型组比较，各用药组肿瘤组织中PI3K、AKT、mTOR的表达无明显差异( P > 0.05)，各用药组肿瘤组织中p-PI3K、p-AKT、p-mTOR表达均明显低于模型组( P < 0.05)；与培元抗癌汤组比较，顺铂组、培元抗癌汤－顺铂组的p-PI3K、p-AKT、p-mTOR表达更低( P < 0.05)，而培元抗癌汤－顺铂组的p-PI3K、p-AKT、p-mTOR表达最低。结果见 图3 图3 ， 表3 表3 。 1：模型组；2：顺铂组；3：培元抗癌汤组；4：培元抗癌汤－顺铂组。 1：Model group; 2：Cisplatin group; 3：PYKA Decoction group; 4：PYKA Decoction-cisplatin group 注：与模型组比较* P < 0.05；与培元抗癌汤组比较△ P < 0.05。 Note: * P < 0.05 compared with model group; △ P < 0.05 compared with PYKA Decoction group. 组别Groups PI3K p-PI3K AKT p-AKT mTOR p-mTOR 模型组Model group 0.56±0.09 0.42±0.040 0.56±0.09 0.48±0.030 0.77±0.28 0.63±0.02 顺铂组Cisplatin group 0.53±0.04 0.12±0.002 *△ 0.53±0.04 0.13±0.002 *△ 0.76±0.17 0.28±0.01 *△ 培元抗癌汤组PYKA Decoction group 0.56±0.02 0.29±0.004 * 0.56±0.02 0.29±0.030 * 0.80±0.02 0.45±0.01 * 培元抗癌汤－顺铂组PYKA Decoction-cisplatin group 0.52±0.03 0.06±0.002 *△ 0.52±0.03 0.08±0.050 *△ 0.78±0.36 0.16±0.01 *△ F 1.465 175.231 1.425 181.789 1.227 769.866 P >0.05 <0.001 >0.05 <0.001 >0.05 <0.001 4　讨论 1 大自噬是生物体内非常关键的分解代谢过程，它通过清除和回收体内不需要的物质来维持细胞自身的稳态和存活 [ 12 12 ] 。Seung J．Chung等研究发现脂联素可通过STK11/LKB1介导的AMPK-ULK1轴激活诱导乳腺癌细胞自噬 [ 13 13 ] 。Chen Liang等研究发现TGFβ 1 可以诱导自噬促进胰腺导管腺癌细胞增殖、迁移 [ 14 14 ] 。Yan Sun等研究发现HyFS可通过诱导自噬而抑制肺癌细胞A549、H460的生长 [ 15 15 ] 。中医药领域也有很多类似的研究，如王硕等研究发现中药香草扶正合剂通过自噬诱导抑制肺癌小鼠模型肿瘤生长 [ 16 16 ] 。王氏等研究发现中药芪冬宁方通过诱导自噬而抑制肺癌细胞A549、NCI-H460的生长 [ 17 17 ] 。张氏等研究发现白藜芦醇可通过促进非小细胞肺癌A549细胞过度自噬而诱导细胞凋亡 [ 18 18 ] 。LC3是研究自噬现象最为重要的生物蛋白标志物 [ 19 19 - 20 20 19-20 ] 。根据LC3对抗体的亲和力分为Ⅰ型、Ⅱ型，其中LC3Ⅱ型亲和力非常强，所以用Western blot法检测LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值就可以定量衡量细胞发生自噬的水平。除此之外，通过电子显微镜下观察自噬体的形成，也是诊断自噬是否激活的金标准。PI3K-AKT-mTOR信号通路是自噬调节中唯一的抑制性通路，各种因素导致该通路的下调，导致诱导细胞自噬增强，诱导恶性细胞凋亡，从而抑制恶性肿瘤的发展。PI3K-AKT-mTOR信号通路中，PI3K家族是一种脂质激酶，可被细胞表面酪氨酸激酶或G蛋白耦联受体等激活 [ 21 21 ] ；AKT，又称为蛋白激酶B，是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，是PI3K-AKT-mTOR信号通路的核心 [ 22 22 ] ；mTOR是一种289 kD丝氨酸/苏氨酸激酶，包含两种功能不同的蛋白质复合物 [ 23 23 ] ，在AKT活化后可发生磷酸化。 从中医的角度分析，肺癌的发病大多由于机体之正气亏损，外邪乘虚侵入，痰瘀邪毒凝结成癌。正如《内经》所云：“邪之所凑，其气必虚。”以《难经》“补不足，损有余”为治疗肺癌之大法，结合临床经验组方培元抗癌汤，临床上治疗恶性肿瘤中晚期患者多可获理想疗效。本实验提示培元抗癌汤在改善生存质量、抑制转移方面有优势，化疗药物优势在于抑制实体瘤的生长，两者结合是取得理想临床疗效的基础。自噬观察方面，提示中药能有效增强肿瘤细胞内自噬，并加速诱导肿瘤细胞凋亡。与模型组比较，培元抗癌汤组肿瘤组织PI3K、AKT、mTOR的表达无明显差异( P > 0.05)，提示非磷酸化下的该信号通路蛋白表达无差异；p-PI3K、p-AKT、p-mTOR表达均明显低于模型组( P < 0.05)，提示磷酸化下的PI3K、AKT、mTOR信号通路被抑制进而启动细胞内自噬。 综上所述，培元抗癌汤能改善小鼠生存质量及抑制肺癌转移及生长，其机制可能是抑制PI3K、AKT、mTOR信号通路，诱导增强肿瘤自噬，加速诱导肿瘤细胞凋亡。研究同样揭示了中医药治疗肺癌的独特优势，即改善生存质量、抗转移，这也是以后需积极探索的重点。 参考文献： JMM Levy ， CG Towers , A Thorburn . 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